Erokamano kuom dhi e mbui. Versi mar brausa ma itiyogo nigi CSS matin ahinya. Mondo iyud duoko maber, wachiwo paro ni iti kod brausa mari ma manyien (kata iwe Mode mar Rieko e Intanet). E kindegi, mondo wane ni ji dhi nyime konyowa, wanyisowa saitno maonge gik ma wanyalo keto e mbui kata JavaScript.
Asid mar propionik (PPA) itiyogo mar puonjore kaka ng’ato ok tiyo maber e del e tuwo mag dongruok mar ng’ut kaka tuwo mar autism. PPA ong’ere ni ketho dongo mar gik ma ngima, loso gik moko e del, kod loso gik moko e del. Kata kamano, gik ma PPA kelo kuom ng’wech mar mitokondria, ng’wech kod ng’wech pod bedo gi pek nikech kaka gik ma kamago nyalo bedo matek e kinde mabiro. Kae, watiyo gi yore mag ng’iyo gik ma nyalo konyowa mondo wafweny kaka PPA mulo ng’injo, ng’injo, kod ng’injo ma chal gi ng’injo mag SH-SY5Y. PPA (5 mM) ne omiyo ng’eny mar ng’ato odok piny (p <0.01), ng’injo mar Feret kod ng’injo mar ng’injo (p <0.05), kod ng’injo mar 2 (p <0.01). 10:10, 11. 10 Kaka ng’ato nyalo ng’eyo ni ng’ato nyalo bedo gi ng’ol maduong’ (p <0.05) e gik ma timore e ng’injo kod ng’injo, ma omiyo orito tim makare mar ng’injo e bwo gik ma kelo pek. Kaachiel gi mago, mRNA ma nyiso ni ng’ato nigi ng’ol maduong’ ahinya. 01). Mano nyiso kaka iloso kendo kaka gik moko chalo, kaka gik moko dongo, kod kaka gik moko timore mondo gimedo tiyo e bwo gik ma kelo pek. Data magwa miyowa ng’eyo manyien kuom kaka PPA nyalo ketho ng’ato kendo nyiso ber mar yore mag ng’ado picha mag somo yore mapek mag rito gik ma ng’ato timo e dwoko mag ng’ato ka ng’ato.
Mitokondria gin gik ma dwarore ahinya e tije mopogore opogore mag selu ma okadho tijegi ma pile pile ma gitimo e loso teko kod loso gik ma ngima. Mitokondria en ng’at maduong’ ma rito ranyisi mag kalsium, ranyisi mag ng’ato kod redox, ranyisi mag ng’ato, lokruok mag epigenetic, dongruok mar selo, pogruok kod tho mar selo ma oket chenro1. Kaachiel gi mano, ng’injo mar mitokondria en gima duong’ ahinya e dongruok mar ng’injo, ngima kod tich kendo ochung’ ahinya e ranyisi mopogore opogore mag ng’injo2, 3,4.
E higini apar mosekalo, chal mar metabolism osebedo ka wuok kaka ng’at ma rito gik madongo mag loso gik moko, pogruok, dongo kod bedo gi plastik5,6. Kawuono, kaka mitokondria chalo kod kaka giwuotho ​​osebedo gik madongo ahinya e mitosis, ma en yo ma teko ma rito mitokondria ma nigi ngima maber e kind sel. Dinamik mar mitokondria ochung’ne yore mapek ma luwore gi ng’ato ka ng’ato chakre e loso mar mitokondria kod teko mar ngima nyaka e loso mar mitokondria, riwruok, tero kod golo gik moko 7,8. Ka ng’ato oketho ng’ato ang’ata kuom yore mag riwruokgi, mano ketho rito tudruok ma nigi ngima maber kendo en gi gik madongo ma nyalo ketho dongruok mar ng’ato. Kuom adier, ng’anjo mar ng’ato nenore e tuwo mang’eny mag paro, tuwo mag ng’ut kod dongruok mar ng’ut, moriwo nyaka tuwo mag autism (ASD) 11,12.
ASD en tuwo ma opogore opogore ma kelo dongruok mar obwongo kendo ma nigi gik ma opogore opogore ma nyalo ketho ng’ato. Onge ng’at ma nyalo ng’ado bura ni ASD nyalo yudore kuom jonyuol, kata kamano, pod ok ong’ere maber gimomiyo ASD nyalo yudore. 13:14, 14. 14. Kuong’ruok mag weche ma wuok kuom ranyisi mag thieth ma pok otimre, nonro mag thieth, kod weche ma ng’ato nyalo ng’eyo kuom gik mathoth miyo ng’ato bedo gi adier ma medore mar bedo ma ok ti maber e ASD. Ne watimo chon ng’iyo mar DNA ma ng’ato ka ng’ato nyalo ng’eyo e grup mar jotuwo ma nigi ASD kendo ne wafwenyo ni ng’ato nyalo ng’iyo gik ma opogore opogore ma ne ochokore e yore ma ng’ato nyalo ng’iyogo gik moko. Bang’e, ne wagolo ripot mar ng’ado bura mopogore opogore mar jotelo madongo mag ng’ado bura kod ng’ado bura, ma ne owinjore gi medo kwan mar kopi mag mtDNA kod loko ng’ado mar ng’ato e ASD16. Data magwa miyowa neno momedore ni ng’wech mar mitokondria kod ng’wech mar ng’ato nigi tich maduong’ ahinya e ng’eyo kaka ng’ato bedo gi tuwo mar ASD. Omiyo, medo ng’eyo kaka ng’ato nyalo ng’eyo winjruok mantie e kind gik ma ng’ato timo, kaka ng’ato chalo, kod kaka otiyo en gino maduong’ ma ng’ato dwaro timo e nonro ma dhi nyime e wi tuoche mag ng’ut ma ng’ato nyalo ng’eyogo kaka ng’ato ok tiyo maber.
Kinde mang’eny, yore mag molekul itiyogo mar puonjore kaka jin moko makende tiyo e dwoko mag mitokondria mag pek. Kata kamano, yo ma kamano nyalo bedo gi giko nikech kaka yore mag rito mitosis nigi yore mang’eny kendo ma kawo thuolo malach. Kaachiel gi mago, ng’eyo mopogore opogore mag jin mag mitokondria en ranyisi ma ok owinjore mar lokruok ma timore e tije, ahinya nikech gin mana jin matin kende e ma itimone nonro. Kuom mano, yore mathoth ma ng’ato nyalo tiyogo mondo opuonjre kaka mitokondria tiyo kod kaka ng’ato tiyo kod teko mar ngima oseket. Morfoloji mar mitokondria nigi tudruok machiegni ahinya gi kaka mitokondria chalo. Kido mar mitokondria, tudruok, kod loso gin gik ma dwarore ahinya e loso teko kod ngima mar mitokondria kod sel. Kaachiel gi mago, gik mopogore opogore mag mitosis keto pachgi kuom lokruok ma timore e kit mitokondria, ma nyalo bedo kaka gik ma konyo e giko mar mitokondria ma ok ti maber kendo miyo ng’ato bedo gi geno mar timo nonro mabiro bang’e.
Mitokondria inyalo ng’iyo kaka ng’ato chalo ka itiyo gi gino ma ng’ato nyalo ng’iyogo gik matin (TEM), ma miyo ng’ato nyalo ng’eyo matut kaka gik moko chalo. TEM neno achiel kachiel kaka gik moko ma ng’ato ka ng’ato ng’iyogo, kar geno mana kuom ndiko mar jin, nyiso protin kata gik ma ng’ato timo e kwan mar selo. Kaachiel gi mago, TEM konyo e somo mar tudruok e kind ng’ato kod gik mamoko ma ng’ato nyalo ng’iyogo, kaka retikulum ma ng’ato nyalo ng’ado e iye kod ng’ato ma nyalo ng’ado ng’ato e ringre ng’ato, ma nigi tich maduong’ ahinya e tije mag ng’ato kod ng’ato ma nyalo rito ng’ato e ot. Omiyo, mano miyo TEM bedo yo maber mar chako somo kaka mitokondria ok tiyo maber kapok iketo pach kuom yore kata gik moko ma ng’ato nyalo ng’ado. Kaka tich mar mitokondria medore bedo gi tudruok gi weche mag ng’ut, nitie dwaro maler mar bedo gi nyalo mar puonjore e yo makare kendo e yor kwan mar ng’ut mitokondria kod gik ma timore e ranyisi mag ng’ut ma itimo e vitro.
E ndiko ni, wabiro nono kaka mitokondria tiyo e ranyisi mar ng’ato ma nigi tuwo mar autism. Ne wagolo ripot motelo kuom pogruok ma nitie e kind ng’ato gi ng’ato ma nigi nyalo mar timo gik moko e ASD15, ma en ng’injo matin mar enzyme ma ng’ato nyalo ng’ado e wi ng’ato. <2Zepa> 23,24,25, ng’ato ong’eyo ni ng’ato nyalo ng’ado bura e wi PCC. PPA osenyiso ni ketho ng’injo mar ng’ato kendo loko tim e ringruok kendo en ranyisi mar le ma oseket mar somo yore mag dongruok mar ng’injo ma nitie e ASD. Kaachiel gi mago, PPA osebedo ka ng’ere ni ketho nyalo mar ng’injo mar ng’injo, loso gik ma ngima kod yweyo e vitro kendo osetiyogo ahinya mar nyiso kaka ng’injo ok ti maber e ng’injo mag ng’injo29,30. Kata kamano, kaka PPA nyalo ketho ng’ato e wi ng’ato ma nigi nyalo mar timo gik moko, pod ok ong’ere maber.
<2Zepa> 10:10, 11. 10 Gima puonjruokni tiyo kod yore mag ng’ado picha ma konyo e ng’eyo kaka PPA nyalo ketho ng’ato e wi kaka ng’ato chalo, kaka otiyo, kod kaka otiyo e sel mag SH-SY5Y. Mokwongo, ne waloso yo mar TEM mar neno lokruok ma timore e kit ng’ato gi ng’ato. Kaluwore gi kaka ng’ato nyalo bedo gi teko, ne watiyo gi ng’iyo mar ng’iyo gik ma timore (MEL) mondo wapim lokruok ma timore e kind gik ma timore e kind gik ma timore e kind ng’ato gi ng’ato, kwan mar ng’ato kod kwan mar gik ma timore e bwo pek mag PPA. E giko, ne wanono ka be ng’injo mar mitokondria kod kaka ng’injono timore tudruok gi lokruok ma timore e kaka gik moko nyisore e gik ma nyalo ketho ngima, ng’injo, kod ng’injo. Ka oting’o gik moko duto kanyachiel, weche ma wan-go nyiso pek mar ng’eyo kaka yore ma rito gik ma ng’ato timo gin gik ma tek. <2Zepa> Wanyiso ber mar TEM e somo kaka gik ma dongo dongo dongo chalo kaka giko ma nyalo pimre mar gik ma dongo dongo dongo e sel mag SH-SY5Y. Kaachiel gi mago, wagolo ler ni data mag TEM miyo weche ma nigi mwandu mang’eny moloyo ka oriw gi yore mag ng’ado picha ma bende mako gik ma timore ma nigi teko e dwoko mar pek ma ng’ato nigo. Kaka ng’ato nyalo ng’eyo kaka molekyu mag rito gik moko ma konyo e loso mitosis mar sel mag ng’ut, mano nyalo miyo wabed gi ng’eyo matut kuom gik ma ng’ato timo e sistem mar ng’ut kod tuoche ma ketho ng’ut.
Mondo omi ng’ato obed gi parruok, ne otiyo gi PPA ka otiyo gi 3 mM kod 5 mM mar ng’injo (NaP). Kapok TEM otimre, ne itiyo gi sampuli ma ne itiyogo e loso sampuli ma nigi presa mamalo kendo ma ne itiyogo gi ng’ich (Fweny 1a). Ne waloso paip mar ng’iyo piche mag mitokondria ma otomatik mondo wapim gik aboro mag morfoloji mag kwan mar mitokondria e kind gik moko adek ma ne odong’ e wi gik ma ngima. Ne wayudo ni thieth mar PPA noloko ahinya gik ang’wen: kama 2, kama, ng’et, kod ng’et Feret (Fweny 1b-e). 1b), to piny (p = 0.003), ng’et (p = 0.0106) kod ng’et Feret duto osedok piny ahinya. Ne nitie dwoko maduong’ (p = 0.0172) e grup ma ne omiye thieth mar 5 mM ka iporo gi grup ma ne omiye thieth (Fweny 1c-e). Kaka ng’ato nyalo dwoko piny ng’enyne kod ng’etne, mano nyiso ni sel ma ne otigodo gi 5 mM PPA ne nigi mitokondria matin kendo ma ng’injo ahinya, kendo ni mitokondria ma kamago ne ok ng’injo ahinya moloyo sel ma ne otimnegi tich ma ne ochung’negi. <2Zepa> Mano bende luwore gi dok piny maduong’ e diamita mar Feret, ma en paramita ma ochung’ kar kende ma nyiso dok piny e bor maduong’ie moloyo e kind ng’et gik matin. Ne oneno lokruok e ng’injo ma ne ochung’ne ng’injo: ng’injo ne ok nen ahinya e bwo teko mar PPA (Fweny 1a, panel B). Kata kamano, ok ni piche duto ne nyiso maler kaka gik ma ne oting’o ng’injogo ne olosi, omiyo ne ok otim nonro mar kwan ma ne oting’o lokruokgo. Gik ma TEM oting’o nyalo nyiso gik adek ma nyalo timore: (1) PPA medo ng’injo kata geng’o ng’injo, ma miyo ng’injo ma ne nitie chon bedo matin; (2) loso gik ma ngima ma medore loso mitokondria manyien kendo matindo kata (3) kelo gik moko ariyogo e kinde achiel. Kata obedo ni gik ma kamago ok nyal pogore gi TEM, lokruok madongo ma timore e kit ringruok nyiso lokruok ma timore e ng’ut ng’ato kod ng’at ma ng’iyo gik moko e bwo pek mag PPA. Bang’e, ne wanono gik mamoko ma ne nyalo konyowa mondo wamed ng’eyo kaka gik ma kamago timore kod yore ma nyalo bedo ni nitie e bwogi.
Asid mar propiyonik (PPA) loko kaka gik moko chalo. (a) Piche mag ng’iyo gik ma ng’ato nyalo ng’iyogo (TEM) ma nyiso ni ng’injo mag ng’ato medore kendo ng’ato bedo matindo kendo ma ng’injo bedo ma ng’injo ka ng’ato medo thieth mar PPA; 0 mM (ma ok otimnegi thieth), 3 mM kod 5 mM, kaka giluwore. Asere makwar nyiso ni nitie mitokondria. (b-e) SH-SY5Y ma ne otimnegi PPA kuom seche 24 ne oik ne TEM kendo duoko ne otimnegi nonro ka oti kod Fiji / PichaJ. Ang’wen kuom gik aboro ne nyiso pogruok maduong’ e kind ng’injo ma ne ochung’ne (ma ok otimnegi thieth, 0 mM PPA) kod ma ne ochung’negi (3 mM kod 5 mM PPA). (b) Kidieny mar 2, (c) Kidieny, (d) Kidieny mar ng’ato, (e) Kidieny mar ng’ato. Ne otiyo gi yo achiel mar ng’iyo pogruok (ng’ado bura gi thieth) kod temo mar Dunnett mar pimo gik mathoth mondo ong’e pogruok maduong’ (p <0.05). Gik ma ondiki nyiso kwan mar mitokondria ma ng’ato ka ng’ato nigo, to bar mag ketho nyiso kwan mar ± SEM. Data ma onyis nyiso n = 3, ma ok okalo sel 24 kuom dwoko achiel; ne otim nonro kuom piche 266 duto; * nyiso ni p <0.05, ** nyiso ni p <0.01.
Mondo wamedo nyiso kaka ng’ato nyalo ng’eyo kaka ng’ato nyalo ng’ado bura ne PPA, ne waketo ng’ato gi ng’ato ma nigi ng’ol (TMRE) kendo ne watiyo gi ng’iyo ma ng’ato nyalo ng’iyogo gik moko ma ng’ato nyalo ng’iyogo kendo ng’iyo gik ma ng’ato timo bang’ seche 24 e 3 kod 5 mM PPA. Chiwo thieth mar gik ma timore mag ng’injo kod ng’injo. (Fweny mar 2a). Bang’ timo nonro mar MEL, ne otim nonro mathoth kuom mitokondria mondo ong’e kwan mar mitokondria kod kwan mar gik ma gin-go. Ne waneno medruok matin to maduong’ e kwan mar gik ma timore mag ng’anjo ma ne timore e 3 mM [4.9 ± 0.3 (p <0.05)] ka iporo gi ng’anjo [5.6 ± 0.3 (p <0.05))] kod ng’anjo [5.4 ± 0.5 (p <0.05)] kod ng’anjo [0.05]. 0.05)] <0.05)] gik ma ne otimore ne omedore ahinya e 5 mM ka iporo gi ma ne ochung’ne (Fweny 3b). 3c) , to kwan mar mitokondria ma ng’ato ka ng’ato ne odong’ ma ok olokore (Fweny 3c). 3d). Ka oting’o gik moko duto kanyachiel, mano nyiso ni loso kendo kaka ng’ato tiyo kaka dwoko ma dwoko maber ma rito tim makare mar ng’ato. Medo mar kwan mar gik ma timore e 3 mM PPA nyiso ni medo mar kwan mar mitokondria en nikech ng’anjo mar mitokondria, kata kamano, nikech kwan mar mitokondria ma ng’ato ka ng’ato odong’ ma ok olokore, biogenesis ok nyal weyo kaka dwoko ma medo dwoko. Kata kamano, wechegi luwore gi gik matin kendo ma ng’injo ma TEM oneno kendo bende ginyiso lokruok madongo e ng’injo ma PPA kelo.
Asid mar ng’ato (PPA) miyo ng’ato bedo gi teko mar loso gik moko mondo orit tim makare mar mbui. SH-SY5Y ne oketgi e dongo, ne otimnegi tich gi PPA 3 kod 5 mM kuom seche 24 kendo ne oketgi gi TMRE kod Hoechst 33342 bang’e ne otimnegi nonro mar MEL. (a) Piche mag mikroskopi ma nyiso rangi kod gik ma ng’ato nyalo ng’iyogo gik ma ng’ato nyalo timo e kinde mar 2 (t2) ne chal ka chal. Gik ma oyier ma onyis e picha ka picha mar ariyo, imedo kendo inyiso e 3D e kinde adek mopogore opogore (t1-t3) mondo onyis kaka gik moko timore bang’ kinde; gik ma timore e fusion inyiso gi rangi ma ralum; gik ma timore mag fission inyiso gi rangi ma ralum. Onyis gi rangi makwar. (b) Namba ma ng’ato ka ng’ato timo kuom gik ma timore. (c) Namba ma ng’ato ka ng’ato nyalo yudo kuom sel ka sel. (d) Kidieny mar ng’ato ka ng’ato (μm3) mar ng’ato ka ng’ato kuom sel ka sel. Data ma onyis gin ma nyiso n = 15 sel e grup ka grup mar thieth. Bar mag ketho ma onyis nyiso kwan mar ± SEM, bar mar rang’iny = 10 μm, * p <0.05.
Asid mar propiyonik (PPA) kelo geng’ruok mar ndiko mar gik ma tudruok gi ng’ato. SH-SY5Y ne otimnegi tich gi PPA mar 3 kod 5 mM kuom seche 24. Ne otim kwan mar jin ma ne ochung’ne RT-qPCR kendo ne oketgi kaka B2M. Jin mag mitokondriya mag loso gik moko (a) cMYC, (b) TFAM, (c) NRF1 kod (d) NFE2L2. (e) STOML2, (f) OPA1, (g) MFN1, (h) MFN2 kod (i) DRP1. 0.05, ** nyiso ni p <0.01, kendo **** nyiso ni p <0.0001. Bars ochung’ ne ranyisi ma ± SEM. Data ma onyis nyiso ni n = 3 (STOM2, OPA1, TFAM), n = 4 (cMYC, NRF1, NFE2L2), kod n = 5 (MFN1, MFN2, DRP1) mag gik ma ngima.
Data ma owuok kuom nonro mag TEM kod MEL kanyachiel nyiso ni PPA loko kaka ng’ato chalo kod kaka ng’ato chalo. Kata kamano, yore mag ng’ado picha ma kamago ok miwa ng’eyo matut kuom gik ma miyo gik ma kamago timore. Omiyo, ne wanono kaka mRNA nyiso gik madongo 9 ma rito ng’wech mar mitokondria, loso gik ma ngima, kod loso gik ma ngima e dwoko mar thieth mar PPA. Ne wapimo kwan mar gik ma nyalo miyo ng’ato oyud tuwo mar del (cMYC), gik ma nyalo miyo ng’ato yueyo (NRF1), gik ma nyalo miyo ng’ato oyud muya (TFAM), gik ma nyalo miyo ng’ato ndiko gik moko ma chal gi NFE2), protin ma chal gi gastrin 2 (STOML2), ng’injo mar ng’injo mar wang’ (OPA1), Mitofu. (DRP1) bang’ seche 24 mag thieth gi PPA ma 3 mM kod 5 mM. Ne waneno ni 3 mM (p = 0.0053, p = 0.0415 kod p <0.0001, kaka giluwore) kod 5 mM (p = 0.0031, p = 0.0233, p <0.0001) ne itiyogo gi PPA. (Fweny mar 3a-c). <2Zepa> 1.7, 2.6 kod 1.9 e 3 mM, kendo 11.2, 3 kod 2.2 e 5 mM. Kaka ng’ato nyalo ng’eyo, ng’at ma nigi ng’eyo ma ng’ato nyalo ng’eyogo ne ok oloki e ng’ato ang’ata ma ne oting’o PPA, kata obedo ni ne oneno ni ng’ato nyalo ng’ado bura ma chal gi ma ng’ato nyalo ng’adoe bura (Fweny 3d).
Bende, ne wanono kaka jin machon ma konyo e rito gik ma nyalo kethore kod gik ma nyalo kethore. STOML2 iparo ni nitie e ng’ado ng’ato, ng’ado ng’ato piny, kod ng’ado ng’ato piny, kendo ng’ado burane ne odok piny ahinya (p <0.0001) gi 3 mM (lokruok ma nyadi 2.4) kod 5 mM (lokruok ma nyadi 2.8) PPA (Fweny 1). 3d). Kaka kamano, ng’ato ka ng’ato ma ne ochung’ ne 3 mM (lokruok mar nyadi 1.6) kod 5 mM (lokruok mar nyadi 1.9) PPA (p = 0.006 kod p = 0.0024, kaka giluwore) (Fweny 3f). Kata kamano, ne ok wanwang’o pogruok maduong’ e nyiso gik ma ng’ato nyalo ng’ado e bwo ng’ato ma nigi ng’ol e bwo 24-h PPA (Fweny 3g-i). Kaachiel gi mago, ne wayudo ni kwan mar gik ma ng’ato nyalo ng’ado e del ok lokore e bwo gik ma chalre (Fweny 4a-d). En gima duong’ ng’eyo ni wechegi nyiso kinde achiel kendo ok nyal nyiso lokruok ma timore e protein kata e rang’iny mar gik ma timore e kinde ma ng’ato ochako bedo gi parruok mar PPA. Kata kamano, dwoko piny maduong’ e nyiso mar cMYC, NRF1, TFAM, STOML2, kod OPA1 nyiso ni ng’ato nyalo bedo gi ng’ol maduong’ e wi gik ma ng’ato nyalo ng’ado e ringre ng’ato. Kaachiel gi mago, wechegi nyiso ber mar yore mag ng’ado picha mondo ipuonjre achiel kachiel lokruok ma timore e giko mar ng’ato e tije mag mitokondria.
Okang’ mar protin ma kelo ng’injo kod ng’injo ne ok olokore bang’ tiyo kod asid mar ng’injo (PPA). SH-SY5Y ne otimnegi tich gi PPA mar 3 kod 5 mM kuom seche 24. Ne opim kwan mar protin ka itiyo gi nonro mar Western blot, kendo ne opim kwan mar protin duto. Nyisruok mar protin maromre kod gik ma ochung' ne protin ma ochung'ne kod protin duto onyis. a - opa1, b - mfn1, c - mfn2, d - drp1. Bars nyiso ± SEM, kendo data ma onyis nyiso n = 3 gik ma ngima. 0.05) ne otimre ka oti kod ng’iyo mar yo achiel mar ng’iyo gik ma opogore opogore kod temo mar Dunnett. Gel kod blot ma ne ondiki e ranyisi mar S1.
Mitokondria ma ok tiyo maber tudruok gi tuoche mathoth ma chakre tuoche mag ng’injo, tuoche mag adundo kod tuoche mag ng’injo nyaka tuoche mag ng’ut. Tuoche mang’eny ma ketho ng’ut ng’ato kod ma ketho ng’ut ng’ato tudruok gi ng’injo ma ng’ato nigo, ma nyiso kaka ng’injogo nigi tich maduong’ e kinde duto ma obwongo tiyogo. Tuwo gi gin kaka tuo mar Parkinson, tuo mar Alzheimer kod tuo mar ASD3,4,18. Kata kamano, yudo tishu mag obwongo mondo ipuonjri tuochegi en gima tek, ahinya ahinya e rang’iny mar mekanik, ma miyo sistem mag ranyisi mag selu bedo yo machielo ma dwarore. E puonjruokni, watiyo gi sistem mar ranyisi mar selula ma watiyo gi selula mag SH-SY5Y ma osethiedh gi PPA mondo wabed gi paro matut kuom ng’injo ma ne oneno e tuoche mag ng’injo, ahinya ahinya e tuoche mag autism. Ka watiyo gi ranyisi mar PPA ma kamano mondo wapuonjre kaka ng’ato nyalo bedo gi ng’eyo matut kuom gik ma nyalo miyo ng’ato obed gi tuwo mar ASD.
Ne wanono kaka wanyalo tiyo kod TEM mondo wane lokruok ma timore e kit ng’ato. En gima duong’ ng’eyo ni nyaka wati gi TEM e yo makare mondo omiye tich maber moloyo. Kaka ng’ato nyalo loso gik ma ng’ato nyalo ng’iyogo, mano miyo orit maber gik ma ng’ato oloso kuom loso gik ma ng’ato oloso e kinde achiel kendo dwoko piny loso gik ma ng’ato oloso34. Kaluwore gi wachni, ne waneno ni sel ma chal gi sel mag SH-SY5Y ne nigi ng’injo ma ok okethore kendo ne nigi ng’injo ma ng’injo ma ng’injo (Fweny 1a). Mano nyiso ber mar yore mag loso gik ma ng’ato nyalo ng’ado e wi ng’ato mondo opuonjre kaka gik moko chalo e gik ma ng’ato nyalo ng’iyogo. Kata obedo ni pim mag kwan gin gik ma dwarore ahinya e ng’iyo weche ma ng’ato nyalo ng’eyo e wi TEM, pod onge winjruok kuom gik ma onego opim mondo onyis lokruok ma timore e kit ng’ato. Kaluwore gi kwan maduong’ mar nonro ma osenono e yor kwan, ne waloso paip mar ng’iyo piche mag mitokondria ma ng’ato nyalo ng’iyogo gik moko aboro ma gin: ng’eny, ng’et2, kwan mar gik ma ng’ato nigo, ng’et ng’ato, ng’et ng’ato, digri. kendo bedo gi ng’iyo.
E kindgi, PPA ne odwoko piny ahinya ng’eny mar 2, ng’et, ng’et, kod ng’et Feret (Fweny 1b-e). Mano ne onyiso ni mitokondria ne obedo matin kendo ma ng’injo, ma luwore gi nonro motelo ma ne nyiso ni ng’injo mar mitokondria ne dok piny bang’ seche 72 mag ng’injo ma ne okelo PPA30. Gik ma kamago nyalo nyiso ni mitokondria nyalo kethore, ma en yo ma dwarore mar geng’o gik ma osekethore kuom ng’injo mar mitokondria mondo oketgi e kethogi kokalo kuom ng’injo mar mitokondria. Nyakonchiel, dok piny e kwan mar mitokondria nyalo bedo ni oriwre gi medo dongo mar gik ma ngima, ma kelo loso mar mitokondria matindo ma pod tin. Medo ng’injo kata ng’injo mar gik moko ma ngima nyiso dwoko ma dwoko piny mondo orit mitosis e lweny gi pek mag mitokondria. Kata kamano, ok nyal weyo dongruok mar mitokondria ma dok piny, ng’ol ma nyalo ketho ng’ato, kata gik mamoko.
Kata obedo ni piche ma nigi ler ma malo ma TEM oloso miyo ng’ato nyalo ng’eyo kido mag ringruok e rang’iny mar mitokondria achiel achiel, yo ma kamano kelo piche ma nigi rang’iny ariyo e kinde achiel. Mondo wapuonjre kaka dwoko ma ng’ato dwoko e wi pek ma ng’ato yudo, ne waketo rangi e del gi TMRE kendo ne watiyo gi gino ma ng’ato nyalo ng’iyogo gik ma ng’ato nyalo ng’iyo gi MEL, ma miyo ng’ato nyalo neno gik ma nyalo timore e kinde mabiro. Ne waneno lokruok ma ok nenre maber to madongo e ng’wech mar mitokondria e bwo pek mag PPA (Fweny 2). mM, kwan mar gik ma ne timore e ng’injo ne omedore ahinya, to gik ma ne timore e ng’injo ne pod odong’ mana kaka ne timore e ng’injo. mM PPA, kata kamano, lokruokgo ne gin maromre, ma nyiso ni ng’injo kod ng’injo chopo e rang’iny maromre e ng’injo ma malo (Fweny 2b). <2Zepa> 3 kod 5 mM PPA, ma nyiso ni ng’eyo malong’o ma ne ochung’ne ng’ato ne odong’ ma ok olokore (Fweny 2d). Mano nyiso nyalo ma ng’ato nigo mar dwoko ng’ato ka ng’ato ma nigi teko matin mar ng’ado bura mondo orit maber ng’ato mondo orit ng’ato e ot ma ok omi ng’ato otur. mM PPA, medruok mar fission oromo mar konyo lokore nyaka e rang’iny manyien, kata kamano, dwarore ni otim lokruok matut moloyo e dwoko mar pek ma kelo gi ng’eny mar PPA.
<2Zepa> Namba mar mitokondria ne omedore e ng’wech ariyo mag PPA, to kwan mar mitokondria ma ne oting’o ne ok olokore ahinya (Fweny 2c). Mano nyalo bedo nikech medore mar gik ma ngima kata medore mar pogruok; kata kamano, ka onge dwoko piny maduong’ e kwan mar mitokondria, en gima nyalo bedo ni ng’injo mar gik ma ngima medore. Kata kamano, weche ma ni e ranyisi mar 2 nyiso ni nitie yore ariyo mag chulo: medo kwan mar gik ma timore e ng’injo, ma luwore gi ng’injo ma ng’ato nyalo ng’injogo, kod medo kwan mar gik ma timore, ma luwore gi ng’injo ma ng’ato nyalo ng’injogo. Kae to, dwoko ma nigi teko kuom parruok matin nyalo bedo gi gik ma timore e kinde achiel ma oriwo ng’injo, ng’injo, loso gik ma ngima, kod ng’injo. Kata obedo ni jondiko motelo osenyiso ni PPA medo ng’injo mar ng’injo 30,39 kod ng’injo mar ng’injo 29, wachiwo neno monyalo loso kendo ng’injo mar ng’injo kod ng’injo mar ng’injo e dwoko mar PPA. Gik ma kamago nyiso adier mar lokruok ma ne otimore e kit ringruok ma ne oneno gi TEM kendo miyo ng’ato bedo gi ng’eyo mathoth e wi yore ma PPA nyalo miyo ng’ato kik ti maber.
Nikech kata ng’iyo mar TEM kata MEL ne ok omiyo neno mowinjore mar yore ma jin tiyogo ma ne omiyo lokruok ma ne oneno e kit dhano timore, ne wanono kaka RNA nyiso jin ma nitie e ng’injo mar gik moko, loso gik moko ma ngima, kod ng’injo mag gik moko. cMYC proto-onkojin en gino ma konyo e ndiko weche ma nyalo konyo e loso gik ma nyalo konyo e loso gik ma nyalo ketho ringruok, asidi mag amino kod asid ma nigi mo. Kaachiel gi mago, cMYC ong’ere ni rito kaka gik ma romo 600 ma nyalo konyo e ndiko, loko, kod loso gik ma ng’ato nyalo loso, moriwo nyaka NRF1 kod TFAM41, nyisore. NRF1 kod TFAM gin gik ariyo madongo ma rito gik ma dongo dongo, ma tiyo e bwo PGC-1α mondo giket dongo mar mtDNA. Yo ma kamano itiyogo gi cAMP kod AMPK ma miyo ng’ato bedo gi teko kendo owinjo maber kaka ng’ato tiyo kod teko kod pek ma ng’ato yudo kuom ng’ado ringre. Bende, ne wanono NFE2L2, ma en gino ma rito gik ma nyalo ketho ngima mar ng’ato, mondo wang’e ka be gik ma PPA kelo nyalo bedo ni ng’ato nyalo bedo gi parruok ma kelo ng’ol.
Kata obedo ni NFE2L2 nyiso ne pod ok olokore, ne wayudo dwoko piny ma luwore gi dose ma ng’ato nyalo ng’ado bang’ 24 h mag thieth gi 3 mM kod 5 mM PPA (Fweny 3a-c). <2Zepa> 10:10, 11. 10 Ka ng’ato onyiso ni cMYC nyalo dwoko piny pek ma ng’ato nigo, kendo e yo mopogore, ng’ato nyalo miyo ng’ato kik ti maber kuom loso kendo kaka ng’ato nyalo ng’iyo gik moko, tudruok mar mbui, kod ng’iyo mar ng’ato. Gima ber en ni, cMYC bende odonjore e rito ng’injo kod ng’injo mar mitokondria 42,43 kendo ong’ere ni omedo ng’injo mar DRP1 kod ng’injo mar mitokondria e kinde ma selo mag ng’injo 44, kaachiel gi loso mar ng’injo mar mitokondria e seche mag ng’injo 45. Kuom adier, ng’injo ma onge cMYC nyiso ni ng’injo mag mitokondria odok piny, ma luwore gi lokruok ma kelo pek mag PPA43. Gik ma kamago nyiso winjruok moro ma kelo mor to pok ong’ere maber e kind cMYC kod ng’wech mar mitokondria, ma miyo ng’ato bedo gi gombo ma kelo mor ne somo mabiro mag dwoko piny ma kelo pek mag PPA.
NRF1 kod TFAM ma dwoko piny luwore gi tich ma cMYC timo kaka ng’at ma loso gik moko madongo. Gik ma kamago bende luwore gi nonro ma ne otim chon e sel mag kansa mar ng’ut dhano ma ne nyiso ni PPA ne dwoko piny mRNA mar NRF1 e seche 22, ma ne owinjore gi ng’injo mar ATP kendo medo ROS46. Jondikogo bende nonyiso ni TFAM ne omedore bang’ seche 8.5 to ne odok e rang’iny ma ne en-go bang’ seche 22. Ka ipimo gi mano, Kim kod jowetene. (2019) nonyiso ni mRNA mar TFAM ne odok piny ahinya bang’ seche 4 mag ng’ol mar PPA e sel mag SH-SY5Y; kata kamano, bang’ seche 72, kwan mar protin mar TFAM ne omedore ahinya kendo kwan mar kopi mag mtDNA ne omedore ahinya. Omiyo, dwoko piny kwan mar gik ma nyalo miyo ng’ato obed gi ngima maber ma ne waneno bang’ seche 24 ok golo oko nyalo mar ni medo kwan mar gik ma nyalo miyo ng’ato obed gi ngima maber nyalo bedo ni ng’ato nyalo bedo gi nyalo mar timo gik moko e kinde motelo. 12:10, 11. 12 Gik ma osetimore chon nyiso ni PPA nyalo dwoko piny mRNA kod protin ma ni e sel mag SH-SY5Y e seche 4 gi ​​dakika 30, to asid mar propionic medo dongo mar ng’ato e seche 12 gi dakika 39. 1α ok en mana ng’at ma rito ndiko mag NRF1 kod TFAM, to bende osenyiso ni rito tije mag MFN2 kod DRP1 kuom rito ng’injo kod ng’injo47. Ka okawe kanyachiel, mano nyiso tudruok machiegni ma nitie e kind yore ma rito dwoko mag dwoko mag mitokondria ma PPA kelo. Kaachiel gi mago, weche ma wan-go nyiso ni ng’ato nyalo bedo gi ng’ol maduong’ e wi ng’ado bura mar ng’ado bura mar gik ma ngima kod ng’ado bura e bwo pek mag PPA.
Jin mag STOML2, OPA1, MFN1, MFN2 kod DRP1 gin moko kuom gik madongo ma rito ng’injo, ng’injo kod ng’injo. Nitie genes mamoko mang’eny ma donjo e ng’wech mar ng’ato, kata kamano, STOML2, OPA1 kod MFN2 oseyudore chon ni gin gik ma opogore opogore e kind jogo ma nigi ASD,16 kendo nonro mang’eny ma ok ochung’ kar ng’ato osenyiso lokruok e gik ma ng’ato nyalo ng’ado e wi ng’ato. 52. Nyiso mar OPA1 kod STOML2 ne odok piny ahinya kuom thieth mar 3 mM kod 5 mM mar PPA (Fweny 3e, f). OPA1 en achiel kuom gik ma rito ng’injo mag ng’injo kokalo kuom tudruok ma achiel ka achiel gi MFN1 kod 2 kendo ochung’ motegno e loso ng’injo mag ng’injo kod loso ng’injo mag ng’injo53. Tich ma adier ma STOML2 timo e loso gik moko e del ok ong’ere maber, kata kamano, gik ma yudore nyiso ni en gi tich maduong’ e loso gik moko e del, e loso gik ma ngima, kod e loso gik ma ngima.
STOML2 nitie e rito tudruok mar muya mar mitokondria kod loso ng’injo mag muya54,55 kendo osenyiso ni oloko ahinya kido mag ng’injo mag kansa56. Kaachiel gi mago, nonro ma ng’ato ka ng’ato timo osenyiso ni tudruok e kind STOML2 kod PINK1 rito nyalo mar ng’ato ma nyalo ng’ado ng’ute. Kaka ng’ato nyalo ng’eyo, STOML2 osebedo ka ng’eyo ni nyalo tudruok achiel kachiel gi MFN2 kendo bende otimo tich maduong’ e keto OPA1 obed motegno kuom geng’o protease ma nigi ting’ mar ketho OPA1. <2Zepa> Kuong’ruok mar STOML2 ma ne oneno e dwoko mag PPA nyalo miyo protin ma kamago obed gi nyalo mar kethore kokalo kuom yore ma luwore gi gik ma nyalo kethore. Kata obedo ni tich ma adier mar STOML2 kod OPA1 e dwoko ma nigi teko ne PPA ok ong’ere maber, dwoko piny ng’eyo mar gik ma nyalo ketho ng’ato (Fweny 3) nyalo ketho winjruok e kind ng’injo kod ng’injo kendo kelo dwoko piny mar ng’injo mar ng’injo (Fweny 3). 1).
24:10, 11. 10 To mRNA kod ng’injo mag MFN1, MFN2 kata DRP1 ne ok olokore ahinya bang’ thieth mar PPA (Fweny 3g-i, Fweny 4). Mano nyalo nyiso ni onge lokruok ma timore e kaka gik ma kamago rito gik ma nyalo miyo ng’ato obed gi ng’iyo mar ng’iyo gik moko. Kata kamano, en gima ber ng’eyo ni ng’ato ka ng’ato kuom jin ang’wen gi bende ochung’ne gik ma lokore bang’ ndiko (PTMs) ma rito kaka protin tiyo. OPA1 nigi yore aboro mopogore opogore mag tudruok ma ng’ato nyalo ng’ado e mitokondria mondo okel gik moko ariyo mopogore opogore 63 . Okang’ ma ng’ato nyalo ng’adogo bura e kind isoform mabor kod machuok, gikone, en gima ng’ado bura kuom tich ma OPA1 nigo e riwruok mar mitokondria kod rito tudruok mar mitokondria64. DRP1 tich rito gi ng’ado ng’wech mar ng’ado ng’wech mar ng’ado ng’wech mar ng’ado ng’wech mar ng’ado ng’wech. Gikone, DRP1 kod MFN1/2 gin GTPases, omiyo, tije nyalo bedo gi teko kuom kwan mar GTP ma iloso e mitokondria 66 . Omiyo, kata obedo ni ng’eyo mar protin ma kamago pod odong’ kaka chon, mano ok nyal nyiso ni protin ok lokore kata kaka ochung’ e kama odak e iye67,68. Kuom adier, gik ma nitie mag PTM ma nigi protin kinde ka kinde tiyo kaka yo mokwongo mar geng’ruok ma nigi ting’ mar loso dwoko mag parruok mager. Ka nitie ng’at ma nigi parruok matin e ranyisi marwa, en gima nyalo bedo ni PTM konyo e medo tich mar protin ma ng’ato nyalo ng’ado kendo ma ng’ato nyalo ng’ado mondo odwoko ng’ato e yo mowinjore ma ok odwarre ni oket ng’ato e mRNA kata e okang’ mar protin.
Ka okawe kanyachiel, weche ma osewach malo kanyo nyiso kaka chik ma ng’ato nyalo ng’ado e wi gik ma ng’ato timo en gima tek kendo ma luwore gi kinde, kod pek ma yudore e ng’eyo kaka gik moko timore. Mondo opuonjre kaka jin nyisore, mokwongo dwarore ni ng’ato ong’e jin makende ma ng’ato dwaro e yo ma ng’ato tiyogo. Kata kamano, gik ma wayudo nyiso ni genes ma ni e yo achiel ok dwoko e yo machalre ka ng’ato nigi parruok machalre. Kuom adier, nonro mosetim chon osenyiso ni gene mopogore opogore ma ni e yo achiel nyalo nyiso dwoko mopogore opogore mag kinde matin30,46. Bende, nitie yore ma ng’eny ma nyalo ketho winjruok mantie e kind ndiko kod kaka jin tiyo. Gik ma ng’ato timo e wi protein nyalo miyo ng’ato ong’e kaka PTMs kod kaka protein tiyo, to bende gikelo pek ma oting’o yore ma ok ng’eny ahinya, kwan mar signal-gi-dwol ma malo, kod ng’eyo ma ok ber.
E ranyisi maeni, somo kaka gik moko dongo ka itiyo gi TEM kod MEL nigi nyalo maduong’ mar dwoko penjo madongo ma mulo winjruok mantie e kind gik ma ng’ato timo kod kaka otiyo, kod kaka mano mulo tuoche. Gima duong’ moloyo en ni, TEM miyo yo ma achiel kachiel mar pim kaka ng’ato chalo kaka giko mar ng’ato ma ok ti maber kendo ma ng’ato nyalo ng’iyogo51. MEL bende chiwo yo ma achiel kachiel mar neno gik ma timore e ng’injo kod ng’injo e alwora ma nigi ng’injo adek, ma miyo ng’ato nyalo ng’eyo kwan mar ng’injo ma ng’injo kata ka onge lokruok e ng’injo mar ng’injo33. Kae, waketo ler kuom ber mar yore mag ng’ado picha mag mitokondria e tuoche madongo mag mitokondria. These diseases are typically characterized by chronic mild metabolic stress characterized by subtle remodeling of mitochondrial networks rather than acute mitochondrial damage. Kata kamano, ng’ado bura ma dwarore mondo orit mitosis e bwo pek ma ok rum nigi gik madongo ma nyalo timore e tije. E weche mag sayans mar ng’ut, ng’eyo maber yore mag dwoko piny nyalo miyo ng’ato oyud weche madongo e wi ng’ut ma ng’ato nyalo yudo ka ng’ato ok tiyo maber.
Kae to, weche ma wan-go nyiso ber mar yore mag ng’ado picha mondo ng’ato ong’e gik ma nyalo timore e kind gik ma ng’ato timo e kind gik ma ng’ato timo e kind gik ma ng’ato nyalo ng’eyo, loko gik ma ng’ato timo, kod gik ma ng’ato timo ma rito gik ma ng’ato timo e del. Ne watiyo gi PPA mondo watim ranyisi mar kaka ng’ato ok tiyo maber e ranyisi mar sel mag ng’ato mondo wayudi ng’eyo matut e wi ng’ato ma nigi ASD. SH-SY5Y sel ma ne otigodo gi PPA ne nyiso lokruok e kit ng’injo: ng’injo ne obedo matindo kendo ma ng’injo, kendo ng’injo ne ok ler maber ka ne gineno gi TEM. MEL ng’iyo nyiso ni lokruogegi timore e kinde achiel gi medo mar gik ma timore mag ng’injo kod ng’injo mondo orit tudruok mar mitokondria e dwoko mar pek matin mag ng’injo. Kaachiel gi mago, PPA ketho ahinya kaka ng’ato nyalo ng’ado bura e wi gik ma ng’ato timo e ringre ng’ato kod kaka ng’ato nyalo rito gik moko e ot. Ne wafwenyo ni cMYC, NRF1, TFAM, STOML2, kod OPA1 gin gik madongo ma rito ng’ato ma ng’ato nyalo ng’ado bura nikech pek mag PPA kendo ginyalo bedo gi tich maduong’ e loso lokruok ma PPA kelo e kit ng’ato kod kaka otiyo. <2Zepa> Somo mabiro dwarore mondo onyis maber lokruok ma PPA kelo kuom kinde matin e nyiso mar gene kod tije mag protein, ketogi e alwora, kod lokruok ma timore bang’ loko weche. Data magwa nyiso kaka yore mag rito gik ma nyalo konyo e dwoko mar ng’ato ka ng’ato nyalo bedo matek kendo nyiso kaka TEM kod yore mamoko mag ng’ado picha konyo e timo nonro mang’eny ma ng’ato nyalo ng’ado.
1VL) ne onyiew gi Sigma-Aldrich. SH-SY5Y sels ne odongo e Dulbecco ma olosi mar ng'injo mar Eagle (DMEM/F-12) kod L-glutamine (SC09411, ScienCell) e flask mag 25 cm2 ma opong' gi 20% mar remo mar nyarombo ma pod ni e ich (FBS91) kendo 1% mar penisilin-streptomaysin (P4333-20ML, Sigma-Aldrich) e 37 °C, 5% mar CO2. 1540054, ThermoFisher Scientific, ne oketgi e centrifuge e 300 g kendo ne oketgi e ng’injo ma romo 7 × 105 sel/ml. Gik moko duto ma ne otim ne otim kuom sel ma ne ok opogore opogore mag SH-SY5Y e kind sula 19-22. PPA itiyogo kaka NaP. 137-40-6, fomula mar kemikol C3H5NaO2, P5436-100G, Sigma-Aldrich) e pi ma ng’ich mar MilliQ nyaka obed gi ng’injo mar 1 M kendo oketgi e 4 °C. E odiechieng’ mar thieth, ng’ad ng’injono gi PPA 1 M nyaka 3 mM kod PPA 5 mM e pi ma ongee remo (DMEM/F-12 ma nigi L-glutamine). <2Zepa> 3 mM, ng’ado bura), 3 mM, kod 5 mM PPA. Ne otim nonro kuom gik ma ne otimre e yo ma ok okalo adek ma ne oting’o gik ma ngima.
SH-SY5Y ne oketi e flak ma borne romo sentimita 25 e kwan mar 5.5 × 105/ml kendo ne odongo kuom seche 24. <2Zepa> PPA ne omedi e flask kapok 24 h mar ng’ado. Chok pelet mag sel ka iluwo yore mapile mag dongo tishu mag le madongo (ma oler malo). 100 μl mar 2.5% mar glutaraldehaid, 1× PBS kendo oketo e 4 °C nyaka chop otim tich. SH-SY5Y ne oketi e ng’injo kuom thuolo matin mondo ogol ng’injogo kendo ogol 2.5% mar glutaraldehaid, 1× PBS ma ne oting’o ng’injo. Odwoko ng’injo e gel ma nigi 4% ma olosi e pi ma oseng’injo (kwan mar ng’injo gi ng’injo en 1:1). Ne iketo ng’injo mag agarose e wi grid ma ne ni e wi sande ma ng’injo kendo ne iketogi gi 1-heksadesen kapok oketgi e ng’injo ma nigi presa mamalo. Sampol ne oketgi e 100% mar aseton ma otuo ma -90°C kuom seche 24. Bang’e, ne oting’o ng’ichno nyaka -80°C kendo ne omedo ng’ich mar 1% mar osmium kod 0.1% mar ng’ich mar ng’ich. Ne oketo gik ma ne okawo e -80°C kuom seche 24. Bang’ mano, ne imedo ng’ich mogik nyaka ng’ich mar ot kuom ndalo mang’eny: kowuok e – 80 °C nyaka – 50 °C kuom seche 24, nyaka – 30 °C kuom seche 24, nyaka – 10 °C kuom seche 24 kendo bang’e nyaka ng’ich mar ot. liet.
Bang’ loso gi gik ma ng’ato nyalo ng’iyogo, ne oketo gik ma ng’ato nyalo ng’iyogo kendo ne oloso gik ma ng’ato nyalo ng’iyogo gik ma ng’ato nyalo ng’iyogo. Ne oket 2% mar uranyl asetat kod lead. Sampol ne oneno ka itiyo gi gino ma ng’ato nyalo ng’iyogo gik matin ma ng’ato nyalo ng’iyogo (ThermoFisher (machon ne iluongo ni FEI), Eindhoven, piny Netherlands) matiyo gi 200 kV (ma ng’ato nyalo ng’iyogo gik moko e piny Lab6) kod kamera mar Gatan CCD (Gatan, UK) ma nigi filta mar teko mar Tridiem.
E ranyisi ka ranyisi ma ne otim gi teknoloji, ne oyudi piche ma dirom 24 mag sel achiel, ma ne omiyo piche duto gin 266. Ne otim nonro kuom piche duto ka oti kod makro mar ng’eyo (ROI) kod makro mar Mitokondria. 17:31,32 kendo oyiene loso piche mag TEM e piny Fiji/PichaJ69. E yo machuok: pichano iloko kendo iloko ka itiyo gi ng’ado ball ma ng’ato nyalo ng’ado (radius mar piksel 60) kod filta mar FFT (ka itiyo gi piksel 60 kod 8 ma malo kod ma piny) kod geng’o laini ma ochung’ tir ma nigi ng’ado mar 5%. Picha ma olosi oketgi e rang’iny mar ng’ato ka ng’ato ka otiyo gi algorithm mar entropi ma malo kendo mask mar ariyo iloso. Ne ogol kuonde ma ne ochung’ne ROIs ma ne oyier gi lwedo e piche mag TEM ma ok otigodo, ma ne nyiso kido mag mitokondria kendo ne ok oketo ng’injo mar plasma kod kuonde mamoko ma ne nigi pogruok mang’eny. ROI ka ROI ma ne ogol, ne otim nonro kuom gik madongo moloyo piksel 600, kendo ne ipimo ng’injo, ng’injo, axes madongo kod matindo, ng’injo mar Feret, ng’injo mar ng’injo, kod ng’injo mar ng’injo ka itiyo gi gik ma ng’injo ma nigi ng’injo ma Fiji/ImageJ oting’o. Kaluwore gi 2017, kwan mar 2, kwan mar gik ma dongo (kwan mar gik madongo nyaka matin), kod kwan mar gik ma dongo (FF) ne okwano kowuok kuom wechegi, kama FF = kwan mar 2/4pi x kwan. Tiende fomiula mar parametrik inyalo yudi e buk mar Merrill, Flippo, kod Strack (2017). Makro ma owachgo yudore e GitHub (neno Wach mar Data Nitie). Ka itimo nonro, ne otim nonro kuom gik ma romo 5,600 e yo ma ne itiyogo gi PPA, kendo ne gin gik ma romo 17,000 (data ok onyis).
155411) mondo omiye ng’injo kuom otieno achiel kae to oketgi e TMRE 1:1000 (ThermoFisher, #T669) kod Hoechst 33342 1:200, HgmaA200 (Sigma200, 200). keto rangi. 10:10, 11. 10 Ne oyudre ka oti kod laser ma 405 nm kod 561 nm kuom dakika 10, kendo ne oyudre kaka z-stacks ma nigi piche 10 ma nigi ng’injo mar az mar 0.2 μm e kind frem mag picha e kinde 12 ma ne luwo bang’e. Ne ochoko piche ka oti kod lens mar LCI Plan Apochromate 100x/1.4 Oil DIC M27. Ne otim nonro e ImageJ ka otiyo gi paip ma ne oler chon kod plugin mar ImageJ mondo opim gik ma timore e kind gik ma nyalo kethore, kwan mar gik ma ng’ato nyalo loso, kod kwan mar gik ma ng’ato nyalo timo e sel ka sel33. Makro mag MEL yudore e GitHub (neno Wach mar Yudo mar Data).
SH-SY5Y ne odongo e plate ma nigi pi auchiel ma ne nigi ng’injo mar 0.3 × 106/mL kuom seche 24 kapok omiye thieth. 1055, Zymo Research) ka otiyo gi lokruok matin: omed 300 μl mar buffer mar RNA e bur ka bur kapok ogol kendo ogol sampul ka sampul kaka okang’ mogik ka otiyo gi 30 μl mar DNase / RNase elution. -pi ma onge chudo. Sampol duto ne otim nonro kuom kwan kod ng’eyo ka gitiyo gi gino ma ng’ato nyalo ng’iyogo gik ma ng’ato nyalo ng’iyogo. 200 μl mar RIPA ma ng’ato nyalo ng’adogo ng’ato, kendo ne opim kwan mar protin ma ne oting’o ng’ato ka ng’ato ka otiyo gi ng’ado protin mar Bradford.
Ne otim loso mar cDNA ka oti kod gino ma itiyogo e loso cDNA ma iluongo ni TetroTM (BIO-65043, Meridian Bioscience) kaluwore gi kaka jalo ma ne oloso gino ne opuonje kendo ne otim lokruok moko. cDNA ne olosi e dwoko ma nigi μl 20 ka otiyo gi 0.7 nyaka 1 μg mar RNA duto. (Table S1) kendo gik ma ne dhi luwogi ne olosi ka oti kod gige ng’iyo ma ne owuok e teknoloji mag DNA ma oriwre. Jin duto ma ne oting’o gombo ne oketi kaka jin mar B2M mar nuklia. Ne opim gi RT-qPCR kaka ng’ato nyalo ng’eyo ni ng’ato nigi ng’eyo matut kuom ng’ato. 10:10, 11. 10 Gik ma ne itiyogo ne gin kaka gik ma ne itiyogo e loso gik moko, cDNA, kod pi ma ne itiyogo gi PCR mondo oyud kwan mogik mar 10 μL kuom gimoro ka gimoro ma ne itimo. 1/2) Ne opimre ka itiyo gi ranyisi mag TaqMan. Ne otiyo gi gik ma ng’ato nyalo ng’iyogo gik moko kaluwore gi kaka jalo ma ne oloso gik moko nopuonje, ka otimo lokruok matindo tindo. 10:10, 11. 10 10 μM mag gik ma ng’ato nyalo ng’iyogo, cDNA, kod pi ma nigi rang’iny mar PCR, ma kelo kwan mogik mar 20 μL kuom dwoko ka dwoko. RT-qPCR ne otimre ka oti kod namba mar ng’ato ma ng’ato nyalo ng’adoe bura. Gik ma timore e mtoka onyisre e Tebol S1. Sampol duto mag cDNA ne omedore e kwan adek kendo ne oloso curve ma ng’ato nyalo ng’ado ka otiyo gi ranyisi ma ng’ato nyalo ng’ado e kwan apar. Gik ma ok ni e sampuli adek ma nigi ng’injo mar ng’injo mar ng’injo (Ct) > 0.5 ne ogol oko mar nonro mondo gine ni data nyalo dwokore kendo30,72. Ne oting’o kwan mar gik ma ng’ato nyalo ng’eyo ka otiyo gi yo mar 2-ΔΔCt79.
1610184) ne oriw gi ng’injo mar Laemmli e kwan mar 2:1 kendo ne otigodo e wi gel ma onge rangi mar 12%. 170-84156, Bio-Rad) ka itiyo gi sistem mar Trans-Blot Turbo (#170-4155, Bio-Rad). Ne ogeng’o ng’ut ng’ato kendo okete gi gik ma geng’o tuoche ma owinjore (OPA1, MFN1, MFN2, kod DRP1) (ma oting’o 1:1000) kuom seche 48, kae to okete gi gik ma geng’o tuoche ma romo seche 1. 170-5061, Bio-Rad) kendo ne ondikigi ka gitiyo gi sistem mar Bio-Rad ChemiDoc MP. Ne otiyo gi 6.1 mar ImageLab e ng’iyo gik ma ng’ato nyalo timo e piny ma milambo. Gel kod blot ma ne ondiki e ranyisi mar S1. Oboke mag gik ma geng’o tuoche ondiki e Tebol S2.
Set mag data inyiso kaka kwan mar ng’ato ka ng’ato kod ketho ma ng’ato ka ng’ato timo (SEM) mar sampuli adek ma ok ochung’ kar ng’ato. Ne otem ng’eyo ka be gin gik ma ng’ato nyalo ng’eyo ka otiyo gi temo mar Shapiro-Wilks (mak mana ka ondik yo machielo) kapok okawo ni ng’ato nyalo ng’ado bura maromre kendo odhi nyime gi ng’ado bura. Kaachiel gi ng’iyo gik ma oseket ka itiyo gi MEL LSD mar Fisher (p <0.05), ANOVA ma yo achiel (ng’at ma ng’ado bura gi ng’at ma ng’ado bura), kod tes mar Dunnett mar pimo gik mathoth mondo ong’e ni en gima duong’ (p <0.05). Nengo mag p madongo inyiso e graf kaka *p <0.05, **p <0.01, ***p <0.001, ****p <0.0001. Gik moko duto ma ne otimre mag kwan kod graf ne otim kendo olosi ka oti kod graf mar 9.4.0.
Makro mag Fiji/ImageJ mag ng’iyo picha mag TEM yudore e wang’ ji duto e GitHub: Makro mar ng’eyo gik ma timore e mitokondria (MEL) yudore e wang’ ji duto e GitHub:
Mitochondria: jotelo madongo mag ng’ado gik moko e del, rito gik moko e ot, parruok, bedo moti kod gik ma ng’ato nyalo ng’ado e del. Dho-Indonesia. Sayans mar thieth ma ngima. 221-241 (2021).
Ben-Shachar, D. Mitokondria ma ok tiyo maber e yore mang’eny e tuwo mar ng’ol, ma en ng’ol mar I kaka gik ma nyalo bedo ni nyalo kelo tuoche. Tuwo mar paro. gik ma itiyogo. 187, 3-10 (2017).
Bose, A. kod Beal, MF Mitokondria ma ok tiyo maber e tuo mar Parkinson. J. Kemistri mar ng’ut. 139, 216-231 (higa 2016).
Mitochondria ma nigi parruok: gik ma ng’ato nyalo ng’ado e wi tuo mar Alzheimer. Mitokondria 59, 48-57 (2021).
Mitochondria kod obwongo: teko mar gik ma ngima kod mamoko. Gik ma kelo kwiri mag obwongo. gik ma itiyogo. 36, 219-238 (2019).
Rangaraju, V. kod jomoko. Mitokondria ma nigi gik mathoth: kaka mitokondria nyalo ketho dongruok mar ng’ut kod tuoche. J. Sayans mar ng’ut. 39, 8200-8208 (2019).
<2Zepa> Cardaño-Ramos, C. kod Morais, VA. ng’eyo piny mangima. J. Mohr. sayans. 22, higa mar 2021
Yu, R., Lendahl, U., Nister, M. kod Zhao, J. nyime. endokrin. (Lozane) 11, 374 (2020).
<2Zepa> Khacho, M. kod Slack, RS Teko mar mitokondria e rito dongo mar obwongo: kowuok e obwongo ma pod dongo nyaka e obwongo maduong’. gerruok. teko. 247, 47-53 (2018).